埃澤思細胞凍存液

ES/iPS Crypreservation Media

一、產(chǎn)品基本信息

二、產(chǎn)品簡介

ES/iPS 埃澤思細胞凍存液是埃澤思生物（Applied Cell®）自主開發(fā)的一款無血清、無需程序降溫的干細胞凍 存液，適用于人多能干細胞（hES/hiPS）的凍存。本產(chǎn)品生產(chǎn)過程遵循 ISO9001 體系,并符合 GMP 指導 原則。

三、產(chǎn)品特性

? 安全：無外源蛋白成分，大大降低各類病毒、霉菌和支原體等的污染風險。

? 穩(wěn)定：全程無血清生產(chǎn)，批次間差異小。

? 高效：凍存細胞復蘇率高于 90%。

? 簡單：即用型產(chǎn)品，且無需程序降溫可直接-80℃過夜后轉(zhuǎn)移至液氮中長期保存。

四、產(chǎn)品內(nèi)容

五、相關產(chǎn)品

人多能干細胞培養(yǎng)基（Applied Cell®: Cat. no.AC-1001000）

人多能干細胞消化液（Applied Cell®: Cat. no.AC-1001008）

無血清細胞凍存液（治療級）（Applied Cell®:AC-1001006）

即用型基質(zhì)膠（Applied Cell®: Cat. no. C-1001007）

六、細胞凍存操作方法

1. 準備對數(shù)期生長的干細胞，加入人多能干細胞消化液（AC-1001008）消化 3~5 min，用 2mL 人多能干細胞培養(yǎng)基（AC-1001000）制備成細胞懸液；

2. 1200 rpm 3min 離心，棄上清，用 1.5-2mL ES/iPS 細胞凍存液重懸細胞，細胞密度 1×106~1×107 /mL；

3. 轉(zhuǎn)移至凍存管中，無需程序降溫，直接將待凍存細胞置于 -80℃過夜，后轉(zhuǎn)移至液氮中長期保存，凍 存時注意直立放置凍存管；

七、細胞復蘇

1. 基質(zhì)膠包被培養(yǎng)板：取出 6 孔板/12 孔板，每孔內(nèi)加入 1 mL/0.5 mL 即用型基質(zhì)膠（AC-1001007）， 輕輕晃動 6 孔板/12 孔板使基質(zhì)膠*覆蓋皿底，置于 37℃培養(yǎng)箱中孵育 1h~2h，實驗前拿出并置于 超凈工作臺/生物安全柜中室溫下平衡 20min。如果暫時不用，可用 Parafilm 封口后 2-8℃ 儲存，并 于 1 周內(nèi)使用。

注意：①一支凍存的干細胞的數(shù)量在 1×106cells/mL 左右，對應 6 孔板 1 孔；②即用型基質(zhì)膠對溫 度敏感，即用即拿，用完后立即放回 4℃冰箱保存，且勿用手直接觸碰基質(zhì)膠液面所及的瓶身，影響 基質(zhì)膠質(zhì)量。

2. 先將 2~3mL 的干細胞培養(yǎng)基加入 15mL 離心管中備用。

3. 解凍：將從液氮中取出的凍存管快速浸入 37℃溫水中，快速搖動，使其在 1~2min 內(nèi)快速解凍； 注意：細胞從液氮中拿出的速度要快，盡量減少其暴露在室溫中的時間。

4. 離心：凍存管中的凍存液解凍后，將其逐滴加入含有干細胞培養(yǎng)基的 15mL 離心管中，將 15mL 離心 管置于低速離心機中配比平衡后，1200 rpm 離心 3min；

5. 重懸：離心后棄上清加 1mL 人多能干細胞培養(yǎng)基對干細胞沉淀進行吹吸混勻，吹吸 3~5 次左右。

6. 接種：吹吸均勻后，將已經(jīng)平衡好的即用型基質(zhì)膠棄掉，將吹打均勻的干細胞懸液加入到已經(jīng)包被 好的 6 孔板中，并補全每孔 2mL 培養(yǎng)體系。

7. 培養(yǎng)：接種后的 6 孔板可以置于倒置相差顯微鏡下觀察接種的干細胞密度以及細胞團塊大小，呈 4 個 細胞以上的團塊較合格，水平十字輕輕晃動 6 孔板/12 孔板使細胞均勻分布。并置于 37℃，5% CO2 的恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)，第 2 天觀察細胞貼壁情況；

八、細胞形態(tài)圖

九、質(zhì)量控制